lorenz kraków ad 10

Wcześniejsze badania dotyczące bezpieczeństwa wykazały, że ekspozycja naczelnych na duże infuzje zakaźnego mysiego amfotropowego wirusa nie wywołuje poważnych efektów patologicznych 16 i w badaniu 21 naczelnych otrzymujących autologiczny szpik kostny modyfikowany genem za pośrednictwem retrowirusów, żadne zwierzę nie wykazywało toksyczności związane z transferem genów aż do 2 1/2 lat po infuzji .29 Ponieważ wektory retrowirusowe wstawiają się losowo do genomu komórki gospodarza, istnieje teoretyczna możliwość, że wstawienie wektora w pobliżu onkogenu może aktywować geny komórkowe prowadzące do złośliwej transformacji TIL. W ten sposób przetestowaliśmy wszystkie transdukowane TIL pod kątem dalszej zależności od interleukiny-2 przed infuzją. Wszystkie transdukowane limfocyty, które otrzymaliśmy, przestały rosnąć krótko po wycofaniu interleukiny-2. Innym problemem teoretycznym była możliwość rekombinacji między wektorem retrowirusowym a ludzkimi endogennymi sekwencjami retrowirusowymi, co prowadzi do produkcji ludzkiego retrowirusa zdolnego do replikacji. Ta możliwość była niewielka, ponieważ znane ludzkie endogenne sekwencje retrowirusowe nie mają homologii z sekwencjami retrowirusowymi w obrębie wektora LNL6. Read more „lorenz kraków ad 10”

lorenz kraków ad 9

Ten gen, który staje się trwałym i stabilnym składnikiem genomu TIL, ma szereg zalet jako znacznik komórkowy, znakujący komórki i całe ich potomstwo tak długo, jak długo przeżywają. Nie może być ponownie użyty przez inne komórki i można go wprowadzić za pomocą zmodyfikowanego retrowirusa za pomocą prostej procedury, która nie wystawia komórki na działanie toksycznych chemikaliów lub auto -radiacji, które mogłyby zmienić właściwości przeciwnowotworowe TIL. Wprowadzone geny można łatwo wykryć za pomocą technik reakcji łańcuchowej polimerazy, zdolnych do identyfikacji zmodyfikowanej komórki spośród 100 000 niemodyfikowanych komórek. Właściwość oporności na neomycynę można również stosować do selekcji zmodyfikowanych komórek do badań funkcjonalnych poprzez ekspozycję in vitro na lek G418, który zabija komórki nietransdukowane, ale nie transfekowane genem. Ponieważ badanie to jest pierwszym zatwierdzonym protokołem klinicznym do wprowadzania obcych genów do ludzi, kompleksowe dane przedstawiono Komitetowi Doradczemu ds. Read more „lorenz kraków ad 9”

lorenz kraków ad 8

Pacjentka 5, 26-letnia kobieta z wieloma podskórnymi złogami czerniaka, rozszerzającą się zmianą na podniebieniu miękkim i przerzutami do płuc, miała całkowitą regresję czerniaka, która trwała 11 miesięcy po leczeniu. Pacjent 3 miał 90% redukcję podskórnych mas po wlewu komórek. Wycięcie powiększającego się guza nowotworowego w dniu 64 i ponowne leczenie TIL z tego nowotworu doprowadziło do ponad 90 procentowej regresji masy para-przełyku, która trwała w przybliżeniu dwa miesiące przed ponownym odrastaniem. Badania bezpieczeństwa
Skutki uboczne leczenia obserwowane u tych pacjentów były podobne do obserwowanych u innych pacjentów otrzymujących TIL i interleukinę-2, jak opisano w innym miejscu [5]. 11 Nie zaobserwowano dodatkowych efektów toksycznych w wyniku retrowirusowej transdukcji TIL. Read more „lorenz kraków ad 8”

lorenz kraków ad 7

Nie stwierdzono żadnych komórek zmodyfikowanych genami we krwi krążącej po 22 dniach u Pacjentów 1, 2 i 4, chociaż wykryto je u Pacjenta 3 w 51 dniu iu Pacjenta 5. w dniu 60. Wszystkie próbki badano w dwóch oddzielnych ślepych eksperymentach dla potwierdzenia dodatnich i ujemnych wyników. Figura 5. Figura 5. Read more „lorenz kraków ad 7”

lorenz kraków ad 6

Ekspresję fosfotransferazy neomycyny, produktu genu NeoR, wykryto również we wszystkich populacjach komórek transdukowanych i żadnej z niepoddanych transdukcji komórek (dane nie przedstawione). Dalsze dowody na ekspresję genu NeoR uzyskano przez udaną hodowlę TIL od wszystkich pacjentów z wyjątkiem Pacjenta 2 w 300 .g na mililitr analogu neomycyny G418. Niepransdukowane komórki wszystkich pacjentów zmarły w stężeniu G418 przekraczającym 300 .g na mililitr. Przykład (od Pacjenta 5) tempa wzrostu transdukowanych genu i niepoddanych transdukcji komórek w różnych stężeniach G418 pokazano na Figurze 1. Tak więc, na podstawie bezpośredniego testu wstawienia genu metodą analizy Southern blot, test na fosfotransferazę neomycyny i oporność na G418 w hodowli, udaną insercję i ekspresję genu NeoR wykazano w TIL pięciu pacjentów badanych przed reinfuzją . Read more „lorenz kraków ad 6”