Aktywacja onkogenu K-ras jako marker prognostyczny w gruczolakoraku płuc

Koncepcja onkogenów zrewolucjonizowała nasze rozumienie raka, ale zdarzają się niezbyt liczne sytuacje, w których wykrycie aktywowanych onkogenów okazało się wartością kliniczną. Trudność w powiązaniu aktywacji onkogenów z określonymi klinicznymi lub biologicznymi cechami guza może wynikać częściowo z problemów technicznych związanych z demonstracją aktywacji onkogenów w małych próbkach nowotworowych. Ostatnie postępy techniczne rozwiązały te problemy w przypadku genów ras. Odkryto, że onkogeny z rodziny ras często ulegają aktywacji w ludzkich nowotworach.1, 2 Trzech dobrze scharakteryzowanych członków tej rodziny – H-ras, K-ras i N-ras – kodują blisko spokrewnione białka 21-kd które mają przypuszczalną rolę w transdukcji sygnałów wzrostu.1 Te białka nabywają potencjał transformacji, gdy aminokwas w pozycji 12, 13 lub 61 jest zastąpiony w wyniku mutacji punktowej w genie kodującym. Te mutacje punktu aktywacji można wykryć za pomocą wysoce specyficznego testu wykorzystującego hybrydyzację oligonukleotydów.3 Gdy ten test stosuje się w połączeniu z reakcją łańcuchową polimerazy, 4 bardzo małe próbki DNA (np. DNA wyizolowane z utrwalonych formaliną fragmentów tkanek zatopionych w parafinie) wystarczy, aby umożliwić skrining pod kątem obecności jednej z tych mutacji punktowych. 5, 6
Wcześniej donieśliśmy, że mutacja punktowa w kodonie 12 onkogenu K-ras w ludzkim raku płuca jest specyficznie związana z podtypem gruczolakoraka, 7 i że taka mutacja występuje w około jednej trzeciej tych nowotworów.8. pacjenci z gruczolakorakiem, którego guzy mogą być całkowicie usunięte przez radykalne zabiegi chirurgiczne. Analiza danych dotyczących przeżycia wykazała, że pacjenci, u których nowotwory wykryto mutacje kodonu C-ras K-ras, mieli niekorzystne rokowanie w porównaniu z pacjentami, którzy nie mieli takiej mutacji.
Metody
Wybór pacjenta i próbki nowotworu
Przebadaliśmy 23 kobiety i 46 mężczyzn z gruczolakorakiem płuc. Ich wiek wynosił od 42 do 80 lat. Czterdziestu ośmiu pacjentów miało guzy stopnia I (T1-2, N0, M0), 14 miało guzy stopnia II (T1-2, N1, M0), a 7 miało guzy stopnia IIIa (T3, N0, M0 lub T1-2, N2, M0) .9 U pięciu pacjentów stwierdzono nowotwory innego pochodzenia przed rozpoznaniem gruczolakoraka płuca (dwóch pacjentów z przewlekłą białaczką mielocytową, dwóch z rakiem płaskonabłonkowym głowy i szyi i jedną z morfologią i genetycznie wyraźny rak piersi10). Żaden z 69 pacjentów nie miał żadnych objawów odległych przerzutów w czasie początkowej oceny nowotworu płuc. Pacjenci byli włączani do badania tylko wtedy, gdy ich guzy mogły być całkowicie wycięte, a badanie patologiczne nie wykazało obecności guza na brzegach resekcji próbki operacyjnej.
DNA zostało wyizolowane z zamrożonych próbek nowotworu od 35 pacjentów, jak podano wcześniej7, 8 oraz z utrwalonego w formalinie, zatopionego w parafinie materiału od 34 pacjentów, jak opisano poniżej. Poprzednie próbki zostały zamrożone na okres do 62 miesięcy, a te ostatnie zostały zatopione w parafinie na okres do 71 miesięcy przed analizą. Wszystkie nowotwory zostały sklasyfikowane jako gruczolakoraki przez jednego badacza zgodnie z klasyfikacją nowotworów płuc według Światowej Organizacji Zdrowia.11 Dane kliniczne (patrz poniżej) dla 69 pacjentów zostały przeanalizowane po przetestowaniu DNA nowotworu pod kątem mutacji punktowych w kodonie K-ras 12.
Przygotowanie tkanki i wykrywanie mutacji punktu Ras Oncogene
Z każdej próbki guza zatopionej w parafinie wycinano 5-.m przekroje i zbierano w fiolkach Eppendorfa
[więcej w: przeszczep przeciwko gospodarzowi, kilaki, zwapnienie aorty ]